详细介绍
品牌 | SHIMADZU/岛津 | 仪器种类 | 实验室 |
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产地类别 | 进口 | 价格区间 | 面议 |
适用行业 | 通用型 | 应用领域 | 生物产业 |
济南血液中乙醇的测定顶空气相色谱法概述:
1 范围
本技术规范规定了血液中乙醇的顶空气相色谱测定方法。
本技术规范适用于血液中乙醇的定性及定量分析。
本技术规范的方法检出限为0.01mg/mL;定量下限为0.05mg/mL。
2 规范性引用文件
下列文件对于本技术规范的应用是*的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本技术规范。凡是不注日期的引用文件,其版本(包括所有的修改单)适用于本技术规范。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法(GB/T 6682-2008,ISO 3696:1987,MOD)
GA/T 122 毒物分析名词术语
3 原理
本法利用乙醇的易挥发性,以叔丁醇为内标,用顶空气相色谱火焰离子化检测器进行检测,经与平行操作的乙醇对照品比较,以保留时间进行定性分析;以峰面积为依据,用内标法定量。
4 试剂和材料
除另有说明外,水为GB/T 6682规定的二级水。
4.1 乙醇
色谱纯。
4.2 乙醇标准溶液
精密称取适量乙醇,用水配成10.0mg/mL乙醇标准储备溶液。储备液在冰箱中冷藏密闭保存,有效期为6个月。试验中所用其它浓度的标准溶液均从上述储备液稀释而得,在冰箱中冷藏密闭保存,有效期为3个月。
4.3 叔丁醇
色谱纯。
4.4 叔丁醇溶液
精密称取适量叔丁醇,用水配成5.0mg/mL叔丁醇储备液。储备液在冰箱中冷藏密闭保存,有效期为12个月。将储备液用水稀释,得40.0μg/mL叔丁醇内标工作液,在冰箱中冷藏密闭保存,有效期为6个月。
5 仪器
5.1 气相色谱仪
配火焰离子化检测器(FID)。
5.2 顶空进样器
配1mL定量进样环。
5.3 样品瓶
10mL,顶空自动进样器用。
5.4 硅橡胶垫
5.5 铝帽
5.6 密封钳
5.7 精密移液器
5.8 自动稀释仪
6 测定步骤
6.1 样品处理
用精密移液器或自动稀释仪取待测血液0.10 mL及0.50 mL 40.0μg/mL 叔丁醇内标工作液,加入样品瓶内,盖上硅橡胶垫,用密封钳加封铝帽,混匀。
6.2 测定
6.2.1 顶空气相色谱测定参考条件
a) 色谱柱(1):DB-ALC1(30m´0.32mm´1.8mm)石英毛细管柱或相当者;
柱温:恒温40°C;
色谱柱(2):DB-ALC2(30m´0.32mm´1.2mm)石英毛细管柱或相当者;
柱温:恒温40°C;
b)载气:氮气,纯度≥99.999%,流速8mL/min;
c)进样口温度:150°C;
d)检测器温度:250°C;
e)加热箱温度:65°C;
f)定量环温度:105°C;
g)传输线温度:110°C;
h)气相循环时间:3.5min;
i)样品瓶加热平衡时间:10.0min;
j)样品瓶加压时间:0.10min;
k)定量环充满时间:0.10min;
l)定量环平衡时间:0.05min;
m)进样时间:1.00min。
6.2.2 定性测定
样品溶液按照顶空气相色谱测定条件测定,以叔丁醇为内标,记录色谱峰的保留时间。将待测样品色谱峰的保留时间与乙醇标准对照品的保留时间比较,相对误差在±2%内,空白对照样品内标物色谱峰正常而无乙醇的色谱峰,一般可以认为待测样品中含有乙醇;必要时,选择不同的色谱条件或用气相色谱-质谱法确证。如果内标物色谱峰正常,而无乙醇的色谱峰时,可认为检验结果为阴性。乙醇对照品和内标气相色谱图,参见附录A。
6.2.3 定量测定
本方法采用内标法-校准曲线法或内标法-单点校正法定量测定。
6.2.3.1 内标法-校准曲线法
采用内标-校准曲线法测定(见附录B)。将乙醇对照品溶液进样,以乙醇和内标峰面积比为纵坐标,乙醇对照品工作溶液浓度为横坐标绘制标准曲线,用标准曲线对待测样品进行定量,所测样品中乙醇的浓度值应在线性范围内。
6.2.3.2 内标法-单点校正法
待测血液样品乙醇浓度在标准溶液浓度的±30%内可用单点法定量。
6.3 平行试验
按以上步骤对同一待测样品进行平行试验。
单柱单检测器两份样品测定结果按两份样品的平均值计算,双样相对相差不得超过10%(有凝块的血样不超过15%)。双样相对相差按式(1)计算:
| C1 - C2|
双样相对相差(%) = ¾¾¾¾¾ ´ 100 ………………………………(1)
`C
式中:
C1、C2¾¾两份样品平行定量测定的结果;
`C ¾¾两份样品平行定量测定结果的平均值(C1+C2)/2。
双柱双检测器两份样品测定结果的相对标准偏差RSD(%)若不超过5%时(有凝块的血样不超过10%),结果按两份样品结果的平均值计算。
7 结果计算
血液中乙醇浓度测定采用内标法-校准曲线法定量或按式(2)计算:
A´ Ai′´c
C = ¾¾¾¾¾¾ …………………………………(2)
A′´Ai
式中:
C¾¾血液样品中乙醇浓度,单位为毫克每毫升(mg/mL);
A¾¾血液样品中乙醇的峰面积;
A′¾¾标准溶液中乙醇的峰面积;
Ai′¾¾标准溶液中内标物的峰面积;
Ai¾¾血液样品中内标物的峰面积;
c¾¾标准溶液中乙醇浓度,单位为毫克每毫升(mg/mL)。
附 录 A
(资料性附录)
乙醇对照品和内标气相色谱图
A.1 按色谱柱(1)条件得乙醇对照品和内标气相色谱图,见图A.1。
叔丁醇(2.09)
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乙醇 (1.43)
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图A.1 按色谱柱(1)条件得的乙醇对照品和内标气相色谱图
A.2 按色谱柱(2)条件得乙醇对照品和内标气相色谱图,见图A.2。
叔丁醇(2.03)
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乙醇 (1.51) |
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